宫颈癌是一种比较常见且发病率较高的女性恶性肿瘤之一，其中85%新发病例都来自于发展中国家[1]。在我国每年约有10万例新增宫颈癌患者，发病率仅次于乳腺癌，并且呈年轻化趋势。高危型人乳头瘤病毒 (human papillomavirus，HPV)的持续感染是宫颈癌发生的关键因素。目前已有200多种HPV基因分型被发现，与生殖道黏膜感染相关的HPV分型根据其致病性分为高危型和低危型。以16型、18型为代表的高危型HPV可引起恶性肿瘤如宫颈癌，低危型主要是以6型、11型为代表，可引起良性的病变，如尖锐湿疣等。HPV的感染与地理、气候、生活习惯等因素有关，所以造成各地区感染的HPV基因型存在很大的差异。本文主要对陕西地区疑似HPV感染的样本进行基因分型和频率统计研究，旨在对本地区宫颈癌的预防以及对疫苗的研制、选择起到一定的参考作用。

1资料与方法

1.1 一般资料 收集2016年1月至2019年4月期间，在西安天博医学检验实验室进行HPV基因分型项目检测的9 749例样本 (已除去重复样本)，所有样本均来自陕西地区各个医院的疑似病例样本、非大规模普查样本。

1.2 试剂与仪器 深圳亚能生物技术有限公司生产的人乳头瘤病毒基因分型 (23型)检测试剂盒。购自深圳亚能生物技术有限公司的YN-H18全自动核酸分子杂交仪、西安天隆科技公司的Genesy 96T基因扩增热循环仪及金属浴、低温高速离心机。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取 充分洗脱宫颈刷，并在管壁上挤干。把洗脱液全部转移到1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心10 min，弃去上清液，保留管底的细胞沉淀。加入50 μL裂解液悬浮沉淀，100℃金属浴加热10 min，13 000 r/min离心10 min，保留上清液待用。

1.3.2 PCR扩增 吸取上步提好的DNA 5 μL分别于HPV基因分型试剂反应液1和反应液2中，放入PCR仪中进行扩增。阴性质控品和阳性质控品用同样的方法进行加样扩增。每次试验设置一个已知阴性和阳性样本作为室内质控。

1.3.3 DNA杂交 此步骤按照亚能YN-H18型杂交仪说明书进行。将杂交膜条编号，放入对应的杂交盒中，将上步所得PCR产物全部加入到对应的杂交盒，开始杂交。每份标本显色后根据蓝色圆点的有无和深浅来判断结果。

1.3.4 结果判定 (1)阴性质控品除IC位点有蓝色斑点出现，其他位点均不显色； (2)阳性质控品必须在相应的HPV基因型位点及IC位点出现显色信号； (3)每张膜条上在IC位点处有蓝色斑点出现，表示实验有效； (4)膜条上总共有23个HPV型别位点：其中高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82 (17个)，低危型6、11 、42、43 、81 、83 (6个)； (5)除IC位点外如有1个蓝色圆点为单一感染，2个为双重感染，3个为三重感染，同时显示4个及以上的蓝色圆点则为多重感染，若无其他点显色即为阴性结果。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，年龄组之间的样本率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 陕西地区HPV分型检出情况 通过对陕西地区9 749例疑似病例女性的宫颈脱落细胞标本进行HPV 23种分型检测，发现阳性病例3 048例，总体感染率为31.26%。主要的感染类型为单一感染，感染率为19.13%，占阳性样本总数的61.19%，单一感染中以高危型为主，感染率为14.59%；HPV双重感染人数次之为7.12%；三重感染及三重以上感染 (多重感染)检出率相近。其中通过对高危型16和18型单独与其他型混合感染类型统计后发现，16型与其他型混合感染占比较高，两种型别同时感染其他型的占比较低，见表1。

表1 陕西地区HPV感染情况感染类型 阳性例数 阳性占比 (%)感染率 (%)1 865 694 257 232 1 422 387 108 37单一感染双重感染三重感染多重感染单一高危16+其他 (不含18)18+其他 (不含16)16+18+其他61.19 22.77 8.43 7.61 46.65 12.70 3.54 1.21 19.13 7.12 2.64 2.38 14.59 3.97 1.11 0.38

2.2 阳性标本中HPV基因型分布 陕西地区3048例HPV阳性样本中占比较高的前四位高危型亚型依次是16型，52型、53型、58型，分别有614例、594例、372例、368例。感染率分别为6.30% (614/9 749)、6.09% (594/9 749)、3.82% (372/9 749)、3.77% (368/9 749)。低危型主要集中在6型、81型、43型、42型这四种亚型中，其中感染人数分别为326例、264例、233例、227例，感染率依次为：3.34% (326/9 749)、2.71% (264/9 749)、2.39% (233/9 749)、2.33% (227/9 749)，见表2。

表2 HPV不同亚型的感染情况型别HPV亚型 阳性例数 阳性占比 (%)感染率 (%)16 52 53 58 51 68 56 59 18 33 66 39 31 35 45 73 82 6 81 43 42 11 83高危型低危型614 594 372 368 288 235 223 211 200 176 172 137 129 68 48 38 38 326 264 233 227 173 27 20.14 19.49 12.20 12.07 9.45 7.71 7.32 6.92 6.56 5.77 5.64 4.49 4.23 2.23 1.57 1.25 1.25 10.70 8.66 7.64 7.45 5.68 0.89 6.30 6.09 3.82 3.77 2.95 2.41 2.29 2.16 2.05 1.81 1.76 1.41 1.32 0.70 0.49 0.39 0.39 3.34 2.71 2.39 2.33 1.77 0.28

文章来源：《陕西水利》 网址: http://www.sxslzz.cn/qikandaodu/2020/1030/626.html